Genética Molecular - Vectores Online version VideoQuiz sobre vectores de clonación utilizando bacterias para la materia Genética de Veterinaria. by NICOLAS TOMASINI 1 Seleccione los tres componentes principales de un vector de clonación Selecciona una o varias respuestas a Sitios de restricción donde se corta el plásmido y se incorpora el ADN de interés b Sitios de restricción donde que permiten restringir el crecimiento de la bacteria que no incorporó el plásmido c Marcadores de selección que permiten seleccionar las bacterias que incorporaron el plásmido d Origen de replicación que induce que la bacteria se replique e Origen de replicación que permite al vector de clonación copiarse dentro de la bacteria 2 ¿Qué es ampR? a Es un gen que otorga a la bacteria que lo porta resistencia al antibiótico ampicilina b Es la región que lleva el gen a amplificar c Es el sitio que la bacteria reconoce para replicar el plásmido d Origen de replicación que induce que la bacteria se replique e Origen de replicación que permite al vector de clonación copiarse dentro de la bacteria 3 Seleccione el orden correcto de pasos para amplificar un fragmento de ADN usando un vector a 1) cortar el ADN de interés y el plásmido con la misma enzima de restricción, 2) mezclar el ADN de interés y el plásmido en un tubo de ensayo, 3) Usar la ligasa para reparar las uniones azucar-fosfato en el ADN, 4) Introducir el plásmido en la bacteria para que se replique b 1) Introducir el ADN y el plásmido en la bacteria, 2) Cortar el plásmido con la enzima de restricción, 3) Utilizar la ligasa para unir el ADN de interés al plásmido c 1) Introducir el ADN de interés en la bacteria, 2) ligar el ADN al plásmido usando la ligasa, 3) Usar la enzima de restricción para amplificar el ADN de interés d Origen de replicación que induce que la bacteria se replique e Origen de replicación que permite al vector de clonación copiarse dentro de la bacteria 4 Considerando el marcador LacZ, si luego de transformar bacterias con un plásmido todas las colonias resultan blancas, sospecharía (seleccione la opción correcta): a Las bacterias no incorporaron el plásmido por lo que es posible que haya fallado la electroporación b Las bacterias incorporaron el plásmido pero el fragmento de ADN de interés no se integró en él, por lo que es posible que haya fallado la digestión con enzimas de restricción c Las bacterias incorporaron el plásmido sin el fragmento de interés pero falló la selección por antibiótico d Las bacterias no incorporaron el plásmido sino solo el fragmento de interés, por lo que falló la ligación e Origen de replicación que permite al vector de clonación copiarse dentro de la bacteria 5 Entonces, los vectores de clonación sirven para a tener muchas copias de un ADN b expresar la proteína codificada por un gen c Las bacterias incorporaron el plásmido sin el fragmento de interés pero falló la selección por antibiótico d Las bacterias no incorporaron el plásmido sino solo el fragmento de interés, por lo que falló la ligación e Origen de replicación que permite al vector de clonación copiarse dentro de la bacteria Explicación 1 Los tres elementos indispensables en un vector de clonación: 1- Origen de Replicación, le indica a la bacteria que debe hacer copias del vector 2- Marcadores de Selección: permiten seleccionar las bacterias que incorporaron el vector de clonación 3 - Sitios de restricción, donde cortan las enzimas de restricción para incorporar el ADN de interés 2 Las bacterias que no poseen el plásmido con el gen ampR no podrán sobrevivir en un medio de cultivo suplementado con ampicilina. Solo formarán colonias las bacterias que porten el plásmido 3 La primera etapa consiste cortar el ADN de interés y el plásmido con la misma enzima de restricción. Luego se colocan juntos en un tubo de ensayo de tal manera de insertar el ADN de interés al plásmido. Luego se usa la ligasa para reparar los cortes en las hebras de ADN. Finalmente, los plásmidos son introducidos dentro de la bacteria donde se replicarán. 4 Recuerda: Si las colonias son azules indica que el plásmido se incorporó pues el gen LacZ (que da color azul) está presente. Ello indica que la electroporación y la selección por antibióticos funcionó a la perfección. Sin embargo, esto también indica que el ADN de interés no se incorporó en el gen. Entonces, la falla puede haber estado en la digestión con la enzima de restricción 5 Un vector de clonación no tiene los elementos necesarios para hacer que un fragmento de ADN de interés se transcriba a ARN, por lo que no es posible que expresen la proteína que codifica el ADN de interés.
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