Técnicas de biología molecular

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PCR, western, southern blot

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Regina Romero

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1	Regina Romero August 6, 2025	% 100	05:39

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Técnicas de biología molecular


Técnicas de biología molecularOnline version PCR, western, southern blot by Regina Romero 1 PCR Polymerase Chain Reaction a proceso que permite crear in vitro múltiples copias de un fragmento de DNA b proceso que permite crear in vitro múltiples copias de un fragmento de RNA c proceso que permite crear in vivo múltiples copias de un fragmento de DNA 2 Componentes de PCR Escoge una o varias respuestas a dNTP, buffer, agua, primer F, primer R, MgCl2, DNApol (Taq, Pfu), DNA diana b Micropipetas, tubos PCR, termociclador c dNTP, buffer, agua, MgCl2 d Termociclador 3 Amplificación exponencial con PCR a No cambia el tamaño de los amplicones b Reducción del tamaño de los amplicones hasta que todos resultan del mismo tamaño c Aumento del tamaño de los amplicones hasta que todos resultan del mismo tamaño 4 Diseño para primers PCR Escoge una o varias respuestas a de 17-28 bases de longitud, mas o menos 50% G+C, b Cada par de primers debe ser complementario c Deben reconocer específicamente las secuencias flanqueantes al fragmento de interés, de ambos primers deben ser iguales o muy cercanas (mas menos 2°C) d Cada primer NO debe contener regiones grandes que sean autocomplementarias y los pares de primers no deben ser complementarios e Cada primer debe contener regiones autocomplementarias 5 Ventajas de la PCR Escoge una o varias respuestas a Ninguna de las anteriores b Requiere muy poco DNA molde, resultados rápidos, amplicones de tamaños precisos c Detección de mutaciones puntuales, no utiliza material radioactivo d Detección de mutaciones naturales e Todas las anteriores 6 Retrotranscripción PCR a Transcribir de RNAm a una cadena de DNAc b Transcribir de DNAc a RNAm c Ninguna de las anteriores 7 q-PCR Quantitative Real Time PCR Escoge una o varias respuestas a Permite cuantificar la cantidad de producto final de la amplificación b Técnica para amplificar, detectar y cuantificar un gen o fragmento del mismo, en una muestra de DNA. Permite la detección en tiempo real de la molécula que se amplifica (formación de amplicones) pero no la cantidad de producto final. c Uso de pigmentos fluorescentes (agentes intercalantes), como; SYBR green, Texas red, etc. Uso de sondas de DNA (Taqman) d Uso de pigmentos fluorescentes (agentes intercalantes), como; SYBR green, Texas red, etc. e Ninguna de las anteriores 8 Multiplex-PCR a Solo tiene un primer que detecta un patógeno b Permite una única detección de patógenos c Permite la detección simultánea de múltiples patógenos mediante la utilización, en una sola reacción, de varios pares de primers. 9 Southern blot Escoge una o varias respuestas a Técnica que permite la transferencia de fragmentos de DNA, presentes en un gel de agarosa, a una membrana a la que se fija el DNA, conservando el patrón electroforético original. b Técnica que permite la transferencia a una placa de vidrio c La membrana posteriormente puede utilizarse para detectar fragmentos específicos mediante hibridación. d La membrana posteriormente no puede utilizarse 10 Western blot Escoge una o varias respuestas a Consiste en unir las proteínas por tamaño mediante electroforesis en gel, transferirlas a una membrana y usar Ac para identificar y visualizar la proteína de interés. b Técnica para detectar y analizar proteínas específicas en una muestra. c Consiste en separar las proteínas por tamaño mediante electroforesis en gel, transferirlas a una membrana y usar Ac para identificar y visualizar la proteína de interés. d Consiste en separar las proteínas por tamaño mediante electroforesis en gel, transferirlas a una membrana y usar Ag para identificar y visualizar la proteína de interés. 11 Northern blot Escoge una o varias respuestas a técnica de biología molecular utilizada para detectar y cuantificar moléculas de ARN específicas dentro de una muestra. b Permite analizar la inhibición génica al medir la abundancia de transcritos de ARN, proporcionando información sobre qué genes se están activando o desactivando en una célula o tejido. c Técnica de biología molecular para detectar y cuantificar DNA en una muestra d Permite analizar la expresión génica al medir la abundancia de transcritos de ARN, proporcionando información sobre qué genes se están activando o desactivando en una célula o tejido. 12 Secuenciación Sanger Escoge una o varias respuestas a Lecturas largas (1000-1200 bases), tasa de error muy baja b Lecturas cortas (1000-1200 bases) c Productividad relativamente baja, costoso, requiere mucho DNA molde y conocer la secuencia de inicio del fragmento a secuenciar d Productividad alta, bajo costo 13 Sistemas NGS (New Generation Systems) Escoge una o varias respuestas a No requiere de librerías ni adaptadores b Requiere de librerías y adaptadores, secuencias cortas de menos de 300 pb, tasa de error alta c Requiere mucho DNA molde d Requiere poco DNA molde, de una o dos piezas de equipo, corre en paralelo de miles a millones de rx de secuenciación 14 Sistema 454 FLX Escoge una o varias respuestas a Secuenciación por síntesis, donde se añaden nucleótidos de forma secuencial y se detecta la liberación de pirofosfato cada vez que se incorpora un nucleótido complementario. b fragmentación->carga en placa->Pi y luminiscencia c liberación de pirofosfato desencadena una reacción química que produce luz, la cual es detectada y analizada para determinar la secuencia del ADN d Ninguna de las anteriores e fragmentación->PCR en emulsión->carga en placa->pirosecuenciación->detección de luz->Pi y luminiscencia->análisis de datos 15 Sistema Illumina Escoge una o varias respuestas a se basa en la química de secuenciación por síntesis (SBS). Este método permite la lectura masivamente paralela de millones de fragmentos de ADN simultáneamente, alta eficiencia y velocidad b Se basa en la secuenciación pero no genera clusters c Preparación de la biblioteca->generación de clusters->secuenciación por síntesis->detección->análisis de datos d Generación de clusters->detección->análisis de datos 16 Sistemas de secuenciación masiva de tercera generación Escoge una o varias respuestas a Sistema MinION: dispositivo que secuencia pero no puede hacerlo simultáneamente b Secuencian directamente secuencias de DNA sin amplificarlas c Secuencian simultánea y directamente miles de moléculas de DNA, sin amplificar para poder detectarlas. d Sistema MinION: dispositivo de secuenciación de ADN portátil y compacto que utiliza nanoporos para leer secuencias de ADN directamente.

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