Genotecas y vectores

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plásmidos, bacteriófagos etc

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Regina Romero

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1	Regina Romero August 6, 2025	% 95	06:57

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Genotecas y vectoresOnline version plásmidos, bacteriófagos etc by Regina Romero 1 Clonación molecular a Proceso que permite crear una copia idéntica de una molécula (generalmente DNA) b Proceso para crear copias genéticamente idénticas de una célula o tejido c Proceso que permite crear copias genéticamente idénticas de otro organismo original 2 Clonación celular a Proceso que permite crear una copia idéntica de una molécula (generalmente DNA) b Proceso para crear copias genéticamente idénticas de una célula o tejido c Proceso que permite crear copias genéticamente idénticas de otro organismo original 3 Clonación de individuos a Proceso que permite crear una copia idéntica de una molécula (generalmente DNA) b Proceso para crear copias genéticamente idénticas de una célula o tejido c Proceso que permite crear copias genéticamente idénticas de otro organismo original 4 Clonación molecular in vivo a utiliza los procesos metabólicos de una célula huésped para producir una copia idéntica de un fragmento (gen, operón) de DNA, el cual es introducido a la célula mediante un vector. b PCR c Western blot 5 Pasos clonación molecular a corte fragmento de interés->corte de vector (enzimas rest)->ligación de ambos fragmentos->Introducción en huésped->selección de células transformantes b corte fragmento de interés->corte de vector (enzimas rest)->ligación de ambos fragmentos->Introducción en huésped c corte de vector (enzimas rest)->ligación de ambos fragmentos->Introducción en huésped->selección de células transformantes 6 Tipos de vectores a Plásmidos (clonación y expresión), Bacteriófagos o fagos (clonación), Cósmidos, faguémidos (clonación y expresión), Cromosomas artificales (clonación y expresión) b Plásmidos (clonación y expresión), Bacteriófagos o fagos (clonación), Cósmidos, faguémidos (clonación y expresión) c Plásmidos (clonación y expresión), Bacteriófagos o fagos (clonación), Cromosomas artificales (clonación y expresión) 7 Plásmidos extracromosómicos de DNA circular Escoge una o varias respuestas a Poseen marcadores seleccionables (resistencia a antibióticos y/o genes complementarios). Sitio de clonación múltiple (MCS), que contienen traslapados o muy cercanos diferentes sitios de restricción. Aceptan insertos de 5-10kb b moléculas grandes circulares de DNA extracromosómico c pequeñas moléculas circulares de DNA de doble cadena, que se replican en las bacterias con independencia del cromosoma bacteriano (sitio ORI), que les da especificidad de huésped. d Vectores lanzadera (shuttle vectors) capaces de replicarse en dos tipos diferentes de huésped. Número variable de copias por célula (alto y bajo número de copias). e Ninguna de las anteriores 8 pBR322 a Dos genes de selección (resistencia a antibióticos ampicilina y tetraciclina). Algunos sitios de restricción en donde se pueden insertar fragmentos de DNA exógenos (3 en Amp, 5 en Tet) inactivación por inserción. b Un gen de selección (resistencia a antibióticos tetraciclina). Algunos sitios de restricción en donde se pueden insertar fragmentos de DNA exógenos (3 en Amp, 5 en Tet) inactivación por inserción. c No tiene gen de selección (resistencia a antibióticos ampicilina y tetraciclina) 9 pGEM serie de plásmidos comerciales Escoge una o varias respuestas a Promotores T7 y SP6 que flanquean a la región de clonación múltiple, marcadores de resistencia (AMPR) y gén lacZ b Sitio ori E.coli, vector de clonación y expresión c Vector de expresión d Sitio ara E.coli 10 Bacteriófagos Escoge una o varias respuestas a virus que infectan a otros virus b Fago alfa c virus que infectan específicamente a bacterias. d Fago λ. Fago M13 (DNAss) 11 Bacteriófago λ Escoge una o varias respuestas a El tercio central de su genoma , la región entre J y N que consta de aproximadamente15 kb puede ser cortada con enzimas de restricción y substituida por un fragmento de DNA foráneo b molécula resultante de DNA recombinante puede ser empaquetada en las cabezas del fago in vitro. c Clonación de Fragmentos de 12 Kb hasta 25 Kb el doble de capacidad que los vectores plasmídicos pequeños. Se usan para construir genotecas de clonación. d molécula resultante de DNA recombinanteno puede ser empaquetada en las cabezas del fago in vitro. e Ninguna de las anteriores 12 Faguémidos y cósmidos Escoge una o varias respuestas a Cósmidos: unión de partes del fago λ y un plásmido b Cósmidos: unión del fago filamentoso M13 y un plásmido (pBR323) c Faguémidos: unión del fago filamentoso M13 y un plásmido (pBR323) d Faguémidos: unión de partes del fago λ y un plásmido 13 Cósmidos Escoge una o varias respuestas a contiene sitios de inicio de la replicación del plásmido y los fragmentos cos del fago, poseen los marcadores seleccionables y el MCS del plásmido b Del plásmido: el ori de replicación y un gen de resistencia a antibiótico, puede contener más segmentos como gen lacZ, que permite la selección blanco/azul de colonias. c Del plásmido: fragmentos complementarios del genoma del fago y los extremos COS, que se emplean para la recircularización y empaquetamiento del DNA. d Permiten clonar fragmentos de hasta 45Kb, e Del fago: fragmentos complementarios del genoma del fago y los extremos COS, que se emplean para la recircularización y empaquetamiento del DNA. f Del fago: el ori de replicación y un gen de resistencia a antibiótico, puede contener más segmentos como gen lacZ, que permite la selección blanco/azul de colonias. 14 Cromosomas artificiales (adicionales al huésped) Escoge una o varias respuestas a BAC cromosomas artificiales de bacterias, aceptan fragmentos entre 30 y 150Kb b BAC cromosomas artificiales de levaduras, aceptan fragmentos entre 200 y 1000Kb c YAC cromosomas artificiales de levaduras, aceptan fragmentos entre 200 y 1000Kb d YAC cromosomas artificiales de bacterias, aceptan fragmentos entre 30 y 150Kb 15 BACs Escoge una o varias respuestas a Cromosomas artificiales de levaduras, basados en el plásmido F. Marcador seleccionable (cat) confiere resistencia a cloranfenicol b Cromosomas artificiales de bacterias, basados en el plásmido F. Marcador seleccionable (cat) confiere resistencia a cloranfenicol c Genes necesarios para la replicación (oriT y repE). Genes sopA y sopB que mantienen bajo el numero de copias d Genes necesarios para la replicación (oriS y repE). Genes sopA y sopB que mantienen bajo el numero de copias e Ninguna de las anteriores 16 YACs Escoge una o varias respuestas a Sitio múltiple de clonación. Origen de replicación del DNA (ARS). Centrómero de levadura b Sitio único de clonación. Origen de replicación del DNA (ARS). Centrómero de levadura c Dos telómeros en los extremos del cromosoma (TEL). Marcador de selección (URA3) d Tres telómeros en los extremos del cromosoma (TEL). Marcador de selección (URA3) e Sitios de restricción únicos para insertar DNA. Centrómero (CEN) para su segregación durante la mitosis. f Sitios de restricción únicos para insertar DNA. Centrómero (CEN) para su agregación durante la mitosis. 17 Tipos de genotecas o bibliotecas genómicas según características y posibilidades de uso Escoge una o varias respuestas a Bibliotecas de clonación (vectores de clonación). Permiten la transcripción y traducción in vivo del DNA clonado b Bibliotecas de clonación (vectores de clonación). Permiten conservar un fragmento o colección de fragmentos de DNA c Bibliotecas de expresión (vectores de expresión). Permiten la transcripción y traducción in vivo del DNA clonado d Bibliotecas de expresión (vectores de expresión). Permiten conservar un fragmento o colección de fragmentos de DNA 18 Tipos de genotecas o bibliotecas genómicas consdierando cobertura de DNA clonado Escoge una o varias respuestas a Genotecas parciales, minigenotecas o bancos de genes. Aislamiento de fragmentos, genes u operones de una cepa de interés. Conservación del DNA de una muestra, especie o individuo b Ninguna de las anteriores c Bibliotecas genómicas. Contienen, en forma de fragmentos clonados de DNA, el genoma completo de un individuo o de una especie. d Todas las anteriores e Bibliotecas de DNAc. Colección de los fragmentos de RNAm que se han retrotranscrito a DNAc. 19 Aplicaciones genotecas de cromosomas artificiales Escoge una o varias respuestas a Todas las anteriores b Construcción y expresión en E. coli de genotecas de cromosomas artificiales bacterianos con fragmentos gDNA (5−120 Kpb) c Ninguna de las anteriores d Identificación de metabolitos o enzimas de interés, BAC permiten crear genotecas más completas.

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Clonación molecular

Clonación celular

Clonación de individuos

Clonación molecular in vivo

Pasos clonación molecular

Tipos de vectores

Plásmidos extracromosómicos de DNA circular

pBR322

pGEM serie de plásmidos comerciales

Bacteriófagos

Bacteriófago λ

Faguémidos y cósmidos

Cósmidos

Cromosomas artificiales (adicionales al huésped)

BACs

YACs

Tipos de genotecas o bibliotecas genómicas según características y posibilidades de uso

Tipos de genotecas o bibliotecas genómicas consdierando cobertura de DNA clonado

Aplicaciones genotecas de cromosomas artificiales