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PRÁCTICA Nº 02 MICROSCOPÍA DE FLUORESCENCIA Y MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA

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PRÁCTICA Nº 02 MICROSCOPÍA DE FLUORESCENCIA Y MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA

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Preuniversitario

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Magalys Monasteios
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Venezuela

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PRÁCTICA Nº 02 MICROSCOPÍA DE FLUORESCENCIA Y MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA
 

PRÁCTICA Nº 02 MICROSCOPÍA DE FLUORESCENCIA Y MICROSCOPÍA ELECTRÓNICAOnline version

Preuniversitario

by Magalys Monasteios
1

¿Cuál es el principio fundamental de la espectrofotometría?

2

¿Qué fenómeno ocurre cuando una molécula absorbe luz en espectrofotometría?

3

¿Cuál es la longitud de onda típica para la luz visible según la tabla de regiones electromagnéticas?

4

¿En qué año fue descubierta la microscopía de fluorescencia?

5

¿Qué son los fluorocromos en microscopía de fluorescencia?

6

¿Cuál es la característica principal de la fluorescencia?

7

¿Qué función cumple el filtro dicromático en un microscopio de fluorescencia?

8

¿Qué es la inmunofluorescencia?

9

¿Cuál es la diferencia principal entre inmunofluorescencia directa e indirecta?

10

¿Cuál es una ventaja de la inmunofluorescencia?

11

¿Qué limita la resolución de los microscopios ópticos convencionales?

12

¿Cuál es la longitud de onda asociada a electrones acelerados a 100 kV en un microscopio electrónico?

13

¿Qué tipo de lente se utiliza para enfocar el haz de electrones en un microscopio electrónico?

14

¿Por qué es necesario operar un microscopio electrónico en vacío?

15

¿Cuál es la función del cañón de electrones en un microscopio electrónico?

16

¿Qué tipo de muestras requiere el Microscopio Electrónico de Transmisión (TEM)?

17

¿Cuál es el propósito de la fijación primaria en la preparación de muestras para TEM?

18

¿Qué técnica se utiliza para obtener imágenes tridimensionales de la superficie de muestras?

19

¿Cuál es la función del escintilador en un SEM?

20

¿Por qué se recubren las muestras con oro o paladio en SEM?

21

¿Cuál es una limitación común de la microscopía electrónica?

22

¿Qué representa una zona electron-densa en una micrografía de TEM?

23

¿Qué unidad es más adecuada para medir organelas celulares como mitocondrias?

24

¿Cuál es la equivalencia correcta de 1 nanómetro en angstroms?

25

¿Cuál es la función del filtro de emisión en un microscopio de fluorescencia?

Explicación

La espectrofotometría consiste en medir la absorción o transmisión de luz de un compuesto, lo que permite identificar o cuantificar sustancias.

La absorción de luz ocurre cuando los electrones de la molécula son promovidos a un nivel de energía mayor debido a la frecuencia de la luz.

La luz visible abarca longitudes de onda entre 400 y 800 nanómetros.

La microscopía de fluorescencia fue descubierta en 1908 por Köhler y Siedentopf

Los fluorocromos son sustancias que emiten un fotón de una longitud de onda específica tras ser excitados por luz.

La fluorescencia es la emisión de luz de una longitud de onda mayor inmediatamente después de la absorción de energía luminosa.

El filtro dicromático refleja la luz de excitación y permite que la luz fluorescente emitida por la muestra pase para formar la imagen.

La inmunofluorescencia utiliza anticuerpos marcados con fluorocromos para localizar proteínas o antígenos específicos en muestras biológicas.

La inmunofluorescencia directa marca directamente el anticuerpo primario, mientras que la indirecta utiliza un anticuerpo secundario marcado que reconoce al primario

La inmunofluorescencia es altamente sensible y permite obtener resultados rápidos, aunque requiere personal especializado y no es 100% específica

La resolución de los microscopios ópticos está limitada por la longitud de onda de la luz visible, que es demasiado grande para ver detalles atómicos.

Los electrones acelerados a 100 kV tienen una longitud de onda asociada de aproximadamente 0.037 Å, mucho menor que la luz visible.

Los microscopios electrónicos utilizan lentes magnéticas para enfocar y dirigir el haz de electrones, ya que las lentes ópticas convencionales no funcionan con electrones.

El vacío es necesario para evitar que los electrones sean absorbidos o desviados por las moléculas del aire, permitiendo un haz de electrones estable.

El cañón de electrones emite los electrones que forman el haz que interactúa con la muestra para formar la imagen.

El TEM requiere cortes ultrafinos para que el haz de electrones pueda atravesar la muestra y formar imágenes de alta resolución.

La fijación primaria con glutaraldehído preserva la estructura del tejido y evita la autólisis durante la preparación

El SEM permite obtener imágenes tridimensionales de la superficie de las muestras mediante el barrido con un haz de electrones.

El escintilador convierte la energía cinética de los electrones secundarios en luz visible para formar la imagen.

El recubrimiento con metales conductores permite que los electrones no se acumulen en la muestra, mejorando la calidad de la imagen.

La microscopía electrónica requiere vacío y preparación especializada, lo que limita su uso en muestras vivas o sin preparación.

Las zonas electron-densas son oscuras porque contienen metales pesados que dispersan los electrones, generando contraste.

Las organelas celulares se miden típicamente en micrómetros, ya que su tamaño es del orden de 1 a varios micrómetros.

Un nanómetro equivale a 10 angstroms, una unidad usada a nivel molecular

El filtro de emisión permite pasar sólo la luz fluorescente emitida por la muestra, bloqueando la luz de excitación para mejorar el contraste.

 
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